عامل تشخیص PCR در زمان واقعی خشک شده با یخ برای تشخیص بسیار حساس از Listeria monocytogenes بدون نیاز به زنجیره سرد

LyoDt^® واکنش زنجیره ای پلیمراز Real-Time PCR خشک شده انجمادی واکنشگر تشخیص برای واکنشگر تشخیص Real-Time PCR خشک شده انجمادی برای

استفاده کنید’راهنمای

1. شرح

واکنشگر تشخیص Real-Time PCR خشک شده انجمادی برای ، یک باسیل کوچک گرم مثبت است که عمدتاً از طریق مسیر دهانی-مدفوعی منتقل می شود. علاوه بر این، می تواند از طریق تماس چشمی یا پوست/غشاهای مخاطی آسیب دیده وارد بدن شود. عفونت معمولاً به صورت سپتی سمی، مننژیت و مونوسیتوز ظاهر می شود.

این محصول یک واکنشگر Real-Time PCR خشک شده انجمادی استبرای تشخیصواکنشگر تشخیص Real-Time PCR خشک شده انجمادی برای T از hlyA بسیار محافظت شدهواکنشگر تشخیص Real-Time PCR خشک شده انجمادی برای  Listeria monocytogenes به عنوان هدف تشخیص استفاده می کند.

این یک mastermix است که حاوی تمام مواد لازم، به جز DNA الگو، است و به صورت تک آزمایشی در لوله های PCR از پیش توزیع شده است تا استفاده از آن آسان باشد. این محصول نیازی به زنجیره سرد برای حمل و نقل و نگهداری ندارد، که به طور قابل توجهی هزینه حمل و نقل را کاهش می دهد و تلفات احتمالی ناشی از ضایعات واکنشگر و آلودگی آئروسل را از بین می برد.

1 کیسه 3. نگهداری

و ماندگارینگهداری  در دمای محیط4مولفهT .T .هنگامی که بسته بندی وکیوم باز شد، لطفاً محصولات استفاده نشده را در کیسه پلاستیکی قابل بسته شدن مجدد ارائه شده با مواد خشک کننده، و 

 در کیسه فویل آلومینیومی نگهداری کنید. 

احتیاط: کوچک شدن گلوله واکنشگر نشان دهنده نفوذ رطوبت به داخل لوله و مرطوب شدن واکنشگر است. هر واکنشی با اندازه گلوله کوچکتر از حد معمول باید دور ریخته شود یا قبل از استفاده با کنترل مثبت آزمایش شودبرای آزمایش نمونه

.   

A1) 

کنترل مثبت را می توان قبل از آبگیری مجدد در دمای محیط نگهداری کرد2) پیپت و نوک

ix آب عاری از نوکلئاز4) کیت استخراج اسید نوکلئیک

مرحلهABI 7500/Fast، Roche LightCycler 480II، BioRad CFX96، Bioer LineGene 9600

.

6. نمونه های قابل قبولT

7. روش عملیات

1) 

نوکلئیک

Aسید nterpretationxtractionاستخراج DNA

 از نمونه ها با استفاده از یک کیت استخراج مناسب. توصیه می شود که DNA با حدود 100 میکرولیتر بافر شستشو داده شود(TEلازم استH عاری از نوکلئاز 2O _{در -20} در مرحله نهایی مولفه. اسید نوکلئیک خالص شده باید بلافاصله استفاده شود یا در دمای -20 درجه سانتیگراد نگهداری شود.با افزودن تهیه کنترل مثبت

کنترل مثبت را می توان قبل از آبگیری مجدد در دمای محیط نگهداری کردتا 12 ماه

.  باید قبل از استفاده مجدداً آبگیری شودبا افزودن 250 میکرولیتر بافر TE یا nuclease-free H2O, به مدت 15-20 ثانیه با سرعت کم ورتکس کنید و به مدت 15-20 ثانیه با سرعت کم سانتریفیوژ کنید. بلافاصله استفاده کنید یا ذخیره کنید _{در -20}°C.3) 4T

ix Preparationالف) بسته بندی وکیوم را باز کرده و نوار 8 لوله ای را بیرون بیاوریدs حاوی واکنشگر. بررسی کنید که گلوله در انتهای لوله قرار دارد

(تعداد لوله ها را در صورت نیاز برش دهیداگر  لازم است) . اگر لوله های ارائه شده با دستگاه شما سازگار نیستند، گلوله واکنشگر را به یک لوله نوری سازگار با دستگاه خود منتقل کنید.ب) لوله ها را باز کرده و درپوش ها را دور بریزید (برای دستگاه های Real-Time PCR مناسب نیست) و مخلوط واکنش را روی یخ به شرح زیر آماده کنید.مولفهحجم / تست

واکنشگر خشک شده انجمادی

(ارائه نشده است).

د) لوله ها را با سرعت کم به مدت 10 تا 15 ثانیه ورتکس کنید و به مدت 20 ثانیه با سرعت 3000 دور در دقیقه سانتریفیوژ کنید و آنها را در دستگاه Real-Time PCR قرار دهید.4) تنظیم RT-PCR

حجم واکنش را 25 میکرولیتر تنظیم کنید و روش تکثیر PCR را به شرح زیر تنظیم کنید. فلورسانس FAM را در 60 درجه سانتیگراد جمع آوری کنید و NONE را به عنوان مرجع غیرفعال انتخاب کنید.

مرحلهدما

زمان چرخه

و Interpretation  الگوCTتفسیر