کیت تست سریع ایمنی مواد غذایی برای تشخیص اشرشیاکلی انتروهموراژیک EHEC با معرف PCR Real-Time لیوفیلیزه شده بدون نیاز به زنجیره سرد

1. شرح

اشریشیا کلی انتروهموراژیک (EHEC) گروهی از E. coli است که قادر به ایجاد اسهال خونی و التهاب روده در انسان است، که سروتیپ O157:H7 نماینده‌ترین سویه است. در عفونت‌های ناشی از غذا، منابع آلودگی شامل گوشت گاو، شیر خام، مرغ و محصولات آن و همچنین میوه‌ها و سبزیجات است، که گوشت گاو وسیله اصلی انتقال است.

این محصول یک معرف PCR با زمان واقعی منجمد خشک شده است برای تشخیص اشریشیا کلی ＜ این از rfbE ژن بسیار محافظت شده اشریشیا کلی  به عنوان هدف تشخیص استفاده می کند. این یک مسترمیکس است که حاوی تمام مواد لازم است، به جز DNA الگو، و به صورت تک آزمایشی در لوله‌های PCR از قبل توزیع شده است تا استفاده از آن آسان باشد. این محصول نیازی به زنجیره سرد برای حمل و نقل و نگهداری ندارد، که به طور قابل توجهی هزینه حمل و نقل را کاهش می دهد و تلفات احتمالی ناشی از ضایعات معرف و آلودگی آئروسل را از بین می برد.

2. مشخصات و ترکیب

3. نگهداری و ماندگاری

نگهداری در دمای محیط (5-3045. اگر لوله های ارائه شده با دستگاه شما سازگار نیستند، گلوله معرف را به یک لوله نوری سازگار با دستگاه خود منتقل کنید.＜ تا 12 ماه پایدار است＜ هنگامی که بسته بندی وکیوم باز شد، لطفاً محصولات استفاده نشده را در کیسه پلاستیکی قابل بسته شدن مجدد ارائه شده با مواد خشک کننده، و در کیسه فویل آلومینیومی نگهداری کنید. 

احتیاط: 

کوچک شدن گلوله معرف نشان دهنده نفوذ رطوبت به داخل لوله و مرطوب شدن معرف است. هر گونه معرف با اندازه گلوله کوچکتر از حد معمول باید دور ریخته شود یا قبل از استفاده با کنترل مثبت آزمایش شود برای آزمایش نمونه.   

4. تجهیزات و معرف های اضافی مورد نیاز

نوکلئیک دستگاه PCR با زمان واقعی

آماده سازی کنترل مثبتپیپت و نوک3) 

PCR با زمان واقعی -آب آزاد4) 

تنظیم RT-PCR5. سیستم های PCR با زمان واقعی سازگار

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600

.＜

آبگوشت غنی سازی مواد غذایی، استفراغ، نمونه های اسهال و غیره.

7. روش عملیات

1) 

نوکلئیک Aو Extractionاستخراج

DNA از نمونه ها با استفاده از یک کیت استخراج مناسب. توصیه می شود که DNA با حدود 100 میکرولیتر بافر شستشو شود (تعداد لوله ها را در صورت نیاز برش دهیدیا  H عاری از نوکلئاز2_O, ). اگر لوله های ارائه شده با دستگاه شما سازگار نیستند، گلوله معرف را به یک لوله نوری سازگار با دستگاه خود منتقل کنید.استخراج. آن2) 

آماده سازی کنترل مثبتکنترل مثبت را می توان قبل از آبگیری مجدد در دمای محیط نگهداری کرد

تا 12 ماه . آن باید قبل از استفاده دوباره آبگیری شود با افزودن 250 میکرولیتر بافر TE یا nuclease-free H2_O, به مدت 15-20 ثانیه با سرعت کم ورتکس کنید و به مدت 15-20 ثانیه با سرعت کم سانتریفیوژ کنید. بلافاصله استفاده کنید یا ذخیره کنید در -20°C45＜

PCR با زمان واقعی Mix Preparationالف) بسته بندی وکیوم را باز کرده و نوار 8 لوله ای را بیرون بیاورید

s حاوی معرف. بررسی کنید که گلوله در انتهای لوله قرار دارد( تعداد لوله ها را در صورت نیاز برش دهیداگر  لازم). اگر لوله های ارائه شده با دستگاه شما سازگار نیستند، گلوله معرف را به یک لوله نوری سازگار با دستگاه خود منتقل کنید.ب) لوله ها را باز کرده و درپوش ها را دور بریزید (مناسب برای دستگاه های PCR با زمان واقعی نیست) و مخلوط واکنش را روی یخ به شرح زیر آماده کنید.

مولفه

ج)

PCR را با استفاده از درپوش (نوارهای) مناسب برای PCR با زمان واقعی بپوشانید(ارائه نشده است).د) لوله ها را با سرعت کم به مدت 10 تا 15 ثانیه ورتکس کنید و به مدت 20 ثانیه با سرعت 3000 دور در دقیقه سانتریفیوژ کنید و آنها را در یک دستگاه PCR با زمان واقعی قرار دهید.

4) 

تنظیم RT-PCRحجم واکنش را 25 میکرولیتر تنظیم کنید و روش تکثیر PCR را به شرح زیر تنظیم کنید. فلورسانس FAM را در 60 درجه سانتیگراد جمع آوری کنید و NONE را به عنوان مرجع غیرفعال انتخاب کنید.

مرحله دما

Analysis و Interpretation  الگو