LyoDt® Real-Time PCR Detection Reagent for Cronobacter پودر خشک شده یخچال

LyoDt® Real-Time PCR Detection Reagent for Cronobacter پودر خشک شده یخچال

1.مقدمه

کرونوباکتریک گونه جدید از باکتری ها است، که پیشگام آنEnterobacter sakazakii کرونوباکتریک بیماری زا شدید ناشی از مواد غذایی است که عمدتاً از طریق فرمول نوزادان آلوده منتقل می شود و باعث مننژیت نوزادان، سپسیس و آنتروکولیت کبودی می شود. میزان مرگ و میر می تواند تا 80٪ برسد.

این محصول یک واکنش PCR در زمان واقعی برای تشخیصکرونوباکتراز ژن بسیار حفظ شده ی ompA استفاده می کندکرونوباکتراین یک مخلوط اصلی است که حاوی تمام مواد ضروری به جز DNA الگوی است و به عنوان یک آزمایش در لوله های PCR برای استفاده آسان از قبل توزیع می شود.این محصول برای حمل و نقل و ذخیره سازی نیازی به زنجیره سرد ندارد.، که به طور قابل توجهی هزینه حمل و نقل را کاهش می دهد و از دست دادن احتمالی ناشی از هدر رفتن واکنشگر و آلودگی اسپری را از بین می برد.

2مشخصات و ترکیب

3. انبار و مدت عمر

در دمای محیط (5-30°C) نگه دارید. تا 12 ماه پایدار است. پس از باز کردن بسته های خلاء، محصولات استفاده نشده را در کیسه پلاستیکی دوباره بسته بندی شده با مواد خشک کننده نگه دارید.و در کیسه ورق آلومینیومی.

احتیاط:

کوچک شدن گلوله واکنشگر نشان دهنده نفوذ رطوبت به لوله و رطوبت واکنشگر است.هر گونه واکنشگر با اندازه گلوله ای بسیار کوچکتر از حد معمول باید قبل از استفاده از آن ها دور ریخته شود یا با کنترل مثبت آزمایش شود.برای آزمایش نمونه.

4تجهیزات اضافی و عوامل مورد نیاز

1) ابزار PCR در زمان واقعی

2) پیپیت و نوک

3) آب بدون نوکلئوز

4) کیت استخراج اسید نوکلئیک

5. سیستم های PCR در زمان واقعی سازگار

ABI 7500/Fast، Roche LightCycler 480II، BioRad CFX96، Bioer LineGene 9600

6نمونه های قابل قبول

شوراب غنی سازی مواد غذایی، استفراغ، نمونه های اسهال و غیره

7روش عمل

1) استخراج اسید نوکلئیک

با استفاده از یک کیت استخراج مناسب DNA را از نمونه ها استخراج کنید.توصیه می شود کهDNAتقریباً با 100μl از آب پاشی الوشن است.(TEیاH بدون نوکلئاز₂O) در مرحله آخراستخراج.اسید نوکلئیک تصفیه شده باید بلافاصله استفاده شود یا در -20°C نگهداری شود.

2) آماده سازی کنترل مثبت

کنترل مثبت می تواند در دمای محیط قبل از هیدراتاسیون تا ۱۲ ماه نگهداری شود.₂O، در سرعت پایین برای 15-20 ثانیه گرد و غبار شده و در سرعت پایین برای 15-20 ثانیه سانتریفیوژ شده است.

3) آماده سازی مخلوط PCR در زمان واقعی

A) بسته ی خلاء را باز کنید و نوارهای 8 لوله ای حاوی واکنشگر را بیرون بیاورید.اگر لوله های ارائه شده با ابزار شما سازگار نباشند، گلوله واکنشگر را به یک لوله نوری سازگار با ابزار شما منتقل کنید.

ب) لوله ها را باز کنید و کاپ (ها) را دور بیندازید (برای دستگاه های PCR زمان واقعی مناسب نیست) و مخلوط واکنش را بر روی یخ آماده کنید.

مرحلهاستخراج.اسید نوکلئیک تصفیه شده باید بلافاصله استفاده شود یا در -20°C نگهداری شود.

2) آماده سازی کنترل مثبت

کنترل مثبت می تواند در دمای محیط قبل از هیدراتاسیون تا ۱۲ ماه نگهداری شود.₂O، در سرعت پایین برای 15-20 ثانیه گرد و غبار شده و در سرعت پایین برای 15-20 ثانیه سانتریفیوژ شده است.

3) آماده سازی مخلوط PCR در زمان واقعی

A) بسته ی خلاء را باز کنید و نوارهای 8 لوله ای حاوی واکنشگر را بیرون بیاورید.اگر لوله های ارائه شده با ابزار شما سازگار نباشند، گلوله واکنشگر را به یک لوله نوری سازگار با ابزار شما منتقل کنید.

ب) لوله ها را باز کنید و کاپ (ها) را دور بیندازید (برای دستگاه های PCR زمان واقعی مناسب نیست) و مخلوط واکنش را بر روی یخ آماده کنید.

* آب بدون نوکلئاز می تواند به عنوان کنترل منفی استفاده شود.

• PCR را با استفاده از کلاه (شوره) مناسب برای PCR در زمان واقعی (موفق نیست) پوشش دهید.

D) لوله ها را با سرعت پایین برای 10 ~ 15 ثانیه گرد و گرد کنید و در 3000rpm برای 20 ثانیه سانتریفیوژ کنید و آنها را در یک ابزار PCR در زمان واقعی قرار دهید.

2) تنظیمات RT-PCR

حجم واکنش را به 25μl تنظیم کنید و روش تقویت PCR را به صورت زیر تنظیم کنید. فلورسنت FAM را در 60 °C جمع آوری کنید و NONE را به عنوان مرجع منفعل انتخاب کنید.

3) تجزیه و تحلیل و تفسیر نتایج